發(fā)布日期：2021/07/20

革蘭氏染色法，是指細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法，屬于復(fù)染法。

革蘭氏染色法的染色原理：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，再用95%乙醇脫色。

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革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，未經(jīng)染色的細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難區(qū)別。經(jīng)染色后，陽性菌呈紫色，陰性菌呈紅色，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，從而用以分類鑒定。

具體操作方法是：
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（1）制片。
取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、干燥、固定。 
要用活躍生長期的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色；涂片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性；火焰固定不宜過熱（以玻片不燙手為宜）。 

（2）初染。
滴加結(jié)晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）染色1-2min，水洗。

（3）媒染。
用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗。 

（4）脫色。
用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時，立即水洗。 
乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌；脫色過度，陽性菌被誤染成陰性菌。因而脫色時間一般為20-30s。
 
（5）復(fù)染。
用番紅液復(fù)染約2min，水洗。

（6）鏡檢。
干燥后，用油鏡觀察。菌體被染成藍(lán)紫色的是革蘭氏陽性菌，被染成紅色的為革蘭氏陰性菌。 


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